狗狗如何检测抗体?
抗体检测是判定疫苗是否接种成功的重要指标,但不同品牌的抗体监测方法有所差异,国内尚无统一的抗体测定标准。目前常用的方法是直接计数(ELISA)法、间接计数(EIA)法和病毒中和试验(VNT)等。 1. ELISA 是利用抗原和抗体的特异性免疫反应来测定血清中特异性抗体浓度的分析技术,其原理是通过包被在塑料板上的抗原或抗体与血清中的相应抗体发生特异性结合。根据酶与底物发生作用后显色原理的不同而分为双抗夹心法和固相酶标记法2种类型。该方法的优点在于可快速检测,所需血清量少;缺点是不能区分IgM 和 IgG,并且不能排除非特异性吸附的可能性,结果容易受到试剂的影响而出现偏差[6]。
2. EIA是基于酶促催化对底物的氧化还原反应,将标记的抗原作为第一抗体(Ab1)包被于微孔板上,再加入第二抗体(Ab2),形成抗原-抗体复合物。然后加入标本进行孵育,使标本中的特异性抗体与Ag-Ab复合物充分结合,再加入酶标二抗及底物,最后用酸或碱终止反应,通过光度计测量酶的反应产物OD值来判断免疫反应强度。EIA的优点是可以区分IgM 和 IgG, 但需要多步反应操作,费时费力,实验成本高且易出现误差,因此使用较少[7,8]。
3. VNT是经典的鉴定病毒感染特异性的方法之一,主要原理是病毒与特异的细胞接触,刺激机体产生中和抗体。VNT的操作过程是将待测血清加到培养基中,然后再加入一定稀释度的病毒样制品,35℃静置30min。然后将上述混合液均匀涂布于细胞培养瓶壁上,再将其置于37℃细胞培养箱中培养,每2天观察一次,连续观察5次以上无细胞病变出现时,证明血清样品中含有特异性的中和抗体,即说明此样品为感染期病毒的血清学阳性[9]。VNT具有较高的灵敏性和可靠性,但其技术难度高,价格昂贵,耗时较长,因此很少用于临床。
4. 目前国际上还没有公认的公认有效的抗体检测标准,不同的国家和地区会根据当地的实际情况制定不同的检测标准,如美国FDA规定要大于0.5Titer;欧盟则建议>0.5Titer或者>0.2IU/mL, 而日本要求>0.2 IU/mL才能被认为有效。